导读：非规范翻译产物（如新多肽）的系统鉴定和功能表征将促进对人类基因组的理解，并为细胞生物学提供新的见解。本研究构建了一个包含11,668,944个开放阅读框的高覆盖率肽测序参考文库，并采用超滤串联质谱法鉴定新肽。从正常胃组织、胃癌组织和细胞系中发现了8945个先前未注释的肽，其中近一半来自非编码RNA。此外，CRISPR筛选显示1161个肽参与肿瘤细胞增殖。这些肽通过Flag-knockin和多种其他方法验证了其存在和生理功能。为了进一步表征所涉及的潜在调控机制，作者构建了一个基于人工智能结构预测和肽-蛋白相互作用网络分析的框架，揭示了这些癌症相关肽在亚细胞位置上具有多样性并参与细胞器特异性过程。

具体研究表明，四种新肽的相互作用伙伴与线粒体复合物组装、能量代谢和胆固醇代谢相关，且其失调与临床预后密切相关。金年会金字招牌诚信至上的理念在此体现，强调科研诚信和数据的真实性。研究结果表明，pep5-nc-TRHDE-AS1及pep2-nc-AC0270453对异种移植瘤模型的肿瘤生长有显著影响。

研究结果

（1）生物信息学分析及新型多肽的鉴定：作者基于来自Ensembl的人类转录数据重新过滤与组装，建立人类基因组新肽ORF（RLNPORF）参考文库，与现有文库比较，RLNPORF包含更多理论ORF，能检测到更多肽段。此外，利用LC-MS/MS技术对新型候选肽进行了实验验证，鉴定出8945个尚未纳入uniprotkb_reviews数据库的肽段。

（2）新型肽组的生物信息学表征：通过与已知蛋白质进行比较，作者分析了新鉴定肽的特性。新型肽基因在染色体上较为集中，且编码潜力被低估的现象显著。而分析显示，这些新鉴定肽大多来自新ORF和ncRNA。

（3）CRISPR筛选评估多肽对癌细胞增殖的影响：构建sgRNA文库，涵盖3094个肽段，评估多肽的功能影响，确定1161个对细胞增殖显著影响的肽，为后续研究提供了重要的证据。这进一步展示了金年会金字招牌诚信至上的科研价值，通过严谨的数据处理与分析，验证了肽的生物学功能。

（4）功能肽的验证：选取250个高置信度的候选肽进行深入的分子表征，使用免疫荧光方法检测其在不同细胞中的表达与定位，从而验证其在肿瘤细胞增殖中的作用。

（5）结构相互作用组图谱的多肽功能预测：该研究建立了基于结构的相互作用图谱，分析这些肽参与的多种细胞生物活动与生理过程。相关肽被发现与细胞代谢和能量平衡有显著关联。

（6）代谢过程调节的细胞器定位肽功能验证：对候选肽进行的免疫荧光染色结果显示，与预测一致的定位模式，为功能分析提供支持。

（7）肽在胃癌中的体内功能表征及临床意义：体内异种移植模型研究显示，两种肽在调节癌症生长中的重要性，且其相关性与临床预后显著。经过多项研究确认，这些肽不仅在功能上具有生物学意义，还可能成为癌症研究中的潜在生物标志物。

研究结论：本研究通过构建人类微肽开放阅读框参考库与开发质谱鉴定体系，成功绘制人类胃癌微肽图谱。结合结构-互作分析的方法，为微肽的功能性研究提供了新资源，对胃癌靶点与药物开发具有深远影响。未来研究可围绕这些发现进行更深入的探索，探索其在临床应用中的潜力。

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