细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁、悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：2天换液

细胞处理指南

收到细胞后，应将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，拍摄不同倍数的照片保存（建议分别拍摄40x、100x和200x）。前三天的照片将作为重要依据，如果未提供照片，则默认收到的状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管中，并保留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱培养。当细胞密度超过80%时，可以进行传代培养： 1) 贴壁细胞的传代： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加025%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 吹打细胞至其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，并在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

2) 悬浮细胞的传代：
方法一：收集细胞，1000 RPM离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液并吹匀，然后按1:2的比例分配到新的含8ml完全培养基的新瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去一半的培养基后，将剩余细胞悬起，按1:2比例转移至新的8ml完全培养基的瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加025%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打以使细胞脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，如需后期转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护设备），快速置于37℃水浴解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外部。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，并用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放在37℃、5% CO2的培养箱中培养。次日换用新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

运输过程中，某些细胞由于贴壁不牢可能会脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，随后进行适当的重悬和传代。

售后条款

金年会金字招牌诚信至上明确细胞出现问题时的处理机制，具体包括：重发情况：
1. 运输过程中遇到的问题包括细胞丢失、瓶身破损等，均可重发。
2. 收到细胞后48小时内发生的污染问题需及时反馈，经过核实后可重发。
不予重发情况：
1. 客户造成的细胞污染或不当操作导致细胞状态不佳的情况不予重发。
2. 如未在收到细胞后的规定时间内反馈，则默认产品合格。

对于细胞的各种培养和处理方式，遵循金年会金字招牌诚信至上的指导可以最大程度地确保实验的成功与细胞的健康。