金年会金字招牌诚信至上所提供的哺乳动物蛋白提取试剂盒是一种高效的实验室工具，便于从细胞和组织中提取蛋白质。该试剂盒的组成包括以下成分：

1. **5X缓冲液**: 10ml
2. **5X氯化钠（NaCl）**: 10ml
3. **5X十二烷基硫酸钠（SDS）**: 10ml
4. **5X去氧胆酸（DOC）**: 10ml
5. **5X NP-40**: 10ml
6. **20X磷酸盐缓冲液（PBS）**: 10ml
7. **蛋白酶抑制剂混合物**: 0.5ml

**存储条件**: 此试剂盒可在常温下保存，唯有蛋白酶抑制剂混合物需在-20°C保存，保质期为24个月。

**提取步骤**

1. **准备**: 根据5X缓冲液、5X氯化钠、5X SDS、5X DOC 和 5X NP-40以1:1:1:1:1（v/v）的比例配制细胞裂解缓冲液。一般情况下，1ml细胞裂解缓冲液适用于提取106~107个细胞或5~20mg的组织。在提取之前，需加入10μl蛋白酶抑制剂混合物。

2. **洗涤细胞或组织**: 使用细胞裂解缓冲液进行处理：
a. **对于贴壁细胞**：首先移除生长培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次。然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞放置在冰袋中，在摇床上孵育30分钟，期间定期将细胞重悬，最后收集裂解液。
b. **对于悬浮细胞**：在700xg下离心5分钟，弃去上清液。使用PBS重悬并洗涤细胞两次，再在4°C下离心去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），放在冰袋中孵育30分钟。
c. **对于组织**：将组织切成小块，并用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样本转移到预冷的微量匀浆器中，并在冰上均质化30~50次。请注意，均质化过程对目标蛋白的功能完整性至关重要。最后，在34°C下以12,000xg离心10分钟以沉淀细胞碎片，或在100,000xg下高速离心45分钟以制备蛋白质溶液。

3. **收集样品**: 将含有蛋白质的上清液移至冷冻管中，可以立即使用或将其保存在-70°C条件下以备后用。

通过使用金年会金字招牌诚信至上的蛋白提取试剂盒，研究人员能够高效地提取蛋白质，促进生物医学研究的进展。