摘要 本文展示了2024年9月中检院生物药物研究室在Electrophoresis和Journal of Chromatography A期刊上发表的两篇文章，重点对多种半胱氨酸偶联抗体-药物偶联物（cysteine-conjugated antibody-drug conjugate，cys-ADC）进行了表征，特别是电荷异质性的分析结果。

前言 这两篇文章均聚焦于cys-ADC类产品。该类产品通过一个可裂解的连接子将细胞毒性药物偶联到单克隆抗体上，使其在精准识别靶细胞（通常为癌细胞）后被内吞，随后在细胞内裂解释放细胞毒性药物，从而实现高效精准杀灭靶细胞，同时显著降低药物的副作用。在cys-ADC的偶联过程中，单克隆抗体轻重链之间的二硫键被部分还原，暴露出自由巯基以供小分子药物的连接，因此，运用非变性质谱（native MS）技术在cys-ADC的表征中显得尤为重要。

工作亮点 这两篇文章的主要亮点在于成像等电聚焦毛细管电泳（Imaged Capillary Isoelectric Focusing，icIEF）与非变性质谱技术的结合，揭示了cys-ADC电荷异质性的重要性。cys-ADC产品中，单克隆抗体含有多种翻译后修饰，如糖基化、脱酰胺和氧化等，加之小分子药物的偶联，其异质性极高。传统的液质联用技术对电荷变异体的分离能力有限。而icIEF技术则从不同角度实现了较高效的电荷异质体分离，随后利用基于Orbitrap平台的高灵敏度非变性质谱技术对各电荷异质峰进行在线的完整蛋白分子量测定。

结果与讨论 研究团队首先利用NIST mAb标准品开展icIEF-non-MS方法的开发。所使用的icIEF系统可实现分析型、直连型与离线分馏收集等功能，并灵活与质谱连接。运用AEstyle系列两性电解质，实现超高分辨率的电荷异质体分离，且对质谱的污染小。Orbitrap Exploris 240超高分辨质谱仪则因其高灵敏度和高质量精度而有助于低丰度组分的发现及准确鉴定，这在非变性质谱条件下的完整分子量分析中尤为关键。

研究结果显示，使用icIEF-native MS流程，对两种cys-ADC产品的电荷异质性进行分析，结果表明两者电荷异质峰的分布存在细微差异，可能与各自的理化性质不同有关，进一步证实了ADC分子的复杂性及深入表征的必要性。对此，使用Thermo Scientific™ Chromeleon™色谱数据系统对实验流程进行仪器控制与数据采集，方便了客户的日常实验需求，并确保满足合规性要求。

结论 本文强调了创新型icIEF-native MS技术在cys-ADC电荷异质性分析中的重要贡献。该技术可广泛应用于具有非共价相互作用分子的电荷异质性分析，为组分鉴定提供完整的分子量信息。同时，金年会金字招牌诚信至上的理念也体现在此技术的合规要求上，满足客户需求。